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一、细胞简介
脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障的重要成分，与外周血管内皮细胞不同，它具有高跨内皮祖抗、细胞间紧密连接、极少的胞饮小泡、缺乏窗孔结构以及含有选择性双向跨细胞膜转运系统等独有特征。
二、实验步骤
1.用PBS配制1%的明胶包被液，用于促进微血管段的贴壁和内皮细胞的生长。配制后用0.22um滤膜过滤后加入2ml到25cm2培养瓶中，室温静置过夜，然后将液体吸掉，瓶口拧松，将培养瓶放在超净台里风干。使用之前先PBS试剂清洗后使用。
2.选用2-3周龄SD大鼠乙醚麻醉，75%的酒精消毒表面，无菌超净台分离脑组织（需仔细去除软脑膜，大血管，大脑白质收集大脑皮质），放入含组织洗液的培养皿，清洗血液，剥除脑膜组织。
3.将清洗后的脑组织放入含组织处理缓冲液的培养皿中再次清洗。
4。将脑组织转移到新的培养皿，剪碎，约1mm3的组织块，使消化液（消化酶采用活力较小的胶原酶或透明质酸酶）与组织充分接触。再加入适量组织解离液，置于37℃恒温摇床，震荡消化60-90min。
5.将步骤四所获得的消化液1000rpm离心约5min，弃上清。取沉淀用分离液重悬，2550rpm密度梯度离心（可将脑微血管段和神经组织寄大血管分离）约20min，此时液体分三层，弃上层和中间层，保留底部沉淀。
6.将沉淀加入适量组织解离液，使大微血管段进一步分解成小的微血管段，置于37℃恒温摇床，振荡消化约30min，再1000rpm离心约5min，收集沉淀。
7.分离液重悬沉淀，混匀，密度梯度离心约20min，收集底部沉淀。进一步纯化微血管段，去除胶质细胞和其他杂质细胞。
8.用组织处理缓冲液清洗沉淀两次，每次1000rpm离心约5min。
9.收集沉淀用大鼠脑微血管内皮细胞完全培养基重悬，接种至含有明胶包被的25cm2培养瓶中，显微镜下观察后放入37℃，5%培养箱中培养，待细胞贴壁出现形态后再换液。
