实验简介
甲基化检测分两种
1.MSP法--用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,若用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明改位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。
2.BSP法--用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化。
实验流程
温馨提示
1.客户需提供检测序列详细信息
2.样本收集:
①组织样本:动物冰上取材≥300mg,液氮速冻保存于-80℃冰箱,干冰运输。
②全血样本:全血采集于肝素钠抗凝管/冻存管中,体积≥2ml,液氮速冻保存于-80℃干冰运输。
③石蜡样本:石蜡包埋切片≥10张,面积大于10mm*10mm,厚度5-10um,冰袋运输。
④DNA样本:体积大于等于20ul,浓度100ng/ul,OD值1.8-2.0;DNA总量≥2ug,-20℃保存,冰袋运输。
⑤细胞样本:细胞处理结束后,去除培养液收集细胞沉淀,细胞量大于等于1-10^6(离心成团米粒大小),液氮速冻保存于-80℃干冰运输。
3.润鼎生物提供完整实验报告及相关实验数据。